Trong chuyến thám hiểm thứ hai nhằm chiếm thuộc địa ở Florida, vào năm 1521, Ponce de Leen bị thương nặng trong một cuộc tấn công của người da đỏ; nhà thám hiểm hy vọng quay trở lại Puerto Rico nhưng đã thất bại trong cuộc chiến giành sự sống trên đường trở về, ở Havana, Cuba.
Ponce de Leen mất mạng trong trận chiến ở Florida.